Дія гри розгортається на території Італії зразка 1476-го року. Альтаїр знятий із посади головного героя та його місце замінив флоренціанський представник знаті Еціо Аудіторі де Фіренце — теж дальній родич Десмонда, з генів якого викачують цінну інформацію. Леонардо да Вінчі, як і кілька інших історичних особистостей тих часів (зокрема Ніколо ло Макіавеллі та Катерина Сфорца), будуть допомагати нашому професійному кілеру. Так Вінчі — своїми неймовірними винаходами (у статті, до речі, йдеться про те, що в Еціо буде відразу два «покриті» кинджали — за штукою на кожну руку), Макіавеллі — порадами як вбити ціль "тихо та без пилу". Ну а Катерина Сфорця — просто ще один союзник на італійській політичній сцені. Однак не всі історичні персони будуть нам друзями. Нажити ворогів — завдання, загалом, не складне. Так, протагоністство пощастить влаштувати замах на життя знатного та впливового італійського політика Лоренцо де Медічі. Розвиватися основна частина гри буде у двох горах — Венеції та Флоренції. З такої нагоди Ubisoft не полінилася і відтворила численні історичні місця, включно з чарівними венеціанськими водні каналами з їх гондолами. Революційні зміни торкнуться і світу за межами міст. Якщо в першій частині там робити було особливо нема чого, то в Assassin's Creed 2 розробники зроблять прилеглі до центрів урбанізації місця «кориснішими» для гравців. Тут же варто сказати про 16 типів місій, що пропонують тепер не тільки побігати містом на час або зібрати з десяток прапорців, змінену систему «Вапна» (зкриватися від переслідувати буде не так просто, як у попередній частині) і парі нових трюків у активі главгероя. Він навчилася плавати, відбирати зброю в ворогів і навіть літати — правда, для цього буде потрібний вже геній Леонардо Так Вінчі та його машини, що «літають».