Assassin's Creed II — це пригодницький екшн від третьої особи. Дія гри відбувається у середні повіки в Італії. Сучасний нащадок найбільших убивць в історії collовується в тілі Еціо Аудіторі де ла Фіренце, що майстерно володіє хашшинськими навичками. Розробники пропонують гравцям поліпшену й оновлену геймплейну систему з першої частини серії — Еціо все-таки може переміщатися як на землі, так і на дахах, навчитися плавати й оновив свій арсенал навичок і пристосувань.

У початкових місіях у розпорядженні гравця представлена система вільного переміщення з можливістю піднятися майже на будь-який об'єкт. Стелс-складнича дає змогу використовувати різні прийоми — у гравця з'явився вибір, як краще зникнути в тій чи іншій ситуації: можна розчинитися в натовпі, сховатися в стогах сіна або садах на дахах, пірнути під воду, влаштувати нерозбір, кину в натовп небагатьом кілька монет або відвернути увагу ворогів за допомогою спеціально зрозумілих людей. Бої в грі блищать різноманітністю завдяки великому арсеналу доступної зброї: мечі, кинджали, димові бомби, метальні ножі, — далеко не всі інструменти смерті, доступні персонажу. У кожної зброї свої сильні та слабкі сторони і, звичайно, своя анімація. Зброя можна купувати в магазинах і користуватися ним постійно або на час бою відбирати в ворогів.

Крім основної сюжетної лінії гравців, так само чекає низка побічних завдань і навіть симулятор середньовічного помістика — який, зрозуміло, має відбудувати заново. Крім цього, гравців так само чекає полювання за легендарними скарбами асасинів, цілий набір різних мініігор, величезна кількість різноманітних історичних особистостей, а також продовження таємничої історії, пов'язаної з так званими "Яблуками Едему".